Práctica 20

Manejo y utilización del stomaher:

Material:
- Balanza.
- Papel de filtro.
- Mortero.
- Huevo.
- Yogur.
- Vaso de precipitados.
- Probeta.
- Water EPR Ph.Eur.
- Pipeta pasteur.
- Bolsas de Stomacher.
- Stomacher.

Técnica:
1. Se pesan 10 g de cáscara de huevo y 10 g de yogur.

 

2. Con el mortero se machaca la cáscara del huevo y y se va vertiendo sobre él los 90 ml de agua previamente medidos y, a la vez, se va echando en la bolsa del stomacher.

 

 

3. Cuando ya está todo introducido en la bolsa, la metemos en el stomacher y lo ponemos durante 60 segundos para homogeneizar la mezcla.

 

Realizamos el mismo proceso con el yogur.

Resultado:
Finalmente se ve cómo las mezclas se han homogeneizado y así luego podremos coger con la pipeta automática el contenido para hacer la dilución seriada.

Dilución decimal de muestras de alimentos:

Material:
- Gradilla.
- Papel de filtro.
- Tubos de ensayo.
- Bureta.
- Pera de succión.
- Pipeta pasteur.
- Vaso de precipitados.
- Pipeta automática.
- Puntas de pipeta.

Técnica:
1. Se echan 9 ml en cada tubo de ensayo y, a continuación, se coge 1 ml con la pipeta automática y se coloca en el primer tubo.

 

2. De ese primer tubo se coge 1 ml y se vierte en el segundo tubo. Así sucesivante.
Cada muestra, de huevo y yogur, se lleva a cabo por separado, es decir, la muestra del yogur se realiza en unos tubos de ensayo diferentes que para el huevo.

Resultado:
Obtenemos las diluciones seriadas para después poder sembrar en medios de cultivo.

Medios de cultivo:

Material:
- Papel de filtro.
- Agua destilada.
- Matraz erlenmeyer.
- Cucharilla de metal.
- Probeta.
- Mechero de alcohol.
- Mechero normal.
- Termómetro.
- Asa de siembra.
- Placas de petri (15 ml cada una aproximadamente).
- Placa calefactora.
- Balanza.
- Cazo.
- Papel de aluminio.
- Agar estándar.
- Bilis verde brillante.
- MacConkey sorbita.
- Barilla agitadora.
- Guantes térmicos.
- Algodón hidrófilo.
- Hisopo.
- Estufa microbiológica.
- Embudo.

Técnica:
Antes de proceder a la pesada del agar hay que realizar el cálculo para saber la cantidad que hay que pesar. Para saberlo hay que tener en cuenta lo que pone en el bote, en este caso dice que en 1 litro de agua se diluyen 23,5 g de agar, por lo que si se quieren emplear 0,5 litros de agua, hacemos los cálculos y obtenemos 11,75 g a pesar.
Para hacer que la mezcla de agar y agua alcance los 100ºC hay dos opciones:
a. Agitar la mezcla del agar con el agua en el agitador magnético, el cual contiene un imán y mide la temperatura.
b. Se pone la mezcla en un cazo y se calienta en la placa calefactora agitándolo con una varilla. La temperatura se mide con un termómetro.
En nuestro caso hemos optado por la opción de calentar la mezcla en el cazo.

1. Se pesan 11,75 g de agar en la balanza, encima de una papel de aluminio, y se vierte al cazo que está encima de la placa calefactora para a continuación añadirle el agua (488 ml previamente introducidos en la probeta).

                                                     


                                                     


2. Con la barilla agitadora se diluye poco a poco hasta que la mezcla sea homogénea. Se pretende que el compuesto alcance los 100ºC llevándolo a ebullición.

                   

3. Una vez alcanzada dicha temperatura se deja 1 minuto a mínima potencia de calor y se vierte en el matraz erlenmeyer por medio de un embudo y usando los guantes térmicos.

4. Se tapa con un algodón hidrófilo y esperamos a que baje a 50ºC.

Para ayudar a que baje la temperatura podemos introducir el matraz ya preparado con el compuesto en un recipiente con agua fría y, una vez que se encuentra a 50ºC se puede introducir en un recipiente al baño maría.
Otra idea para que baje la temperatura es repartir el compuesto en dos matraces.
5. Como he comentado antes, se reparte el contenido en dos matraces.

6. Ahora vamos preparando las placas de petri dejándolas medio abiertas para echar el agar y encendemos el mechero de alcohol para, mientras se realiza el vertido, mantener la asepsia y evitar cualquier infección.

7. Una vez vertido todo el contenido en las placas, esperamos a que gelifique, se tapa la placa y se da la vuelta.

                                                             

Este mismo procedimiento lo realizamos con los otros dos agares, es decir, con el Bilis-verde brillante (hay que llevarlo a 120ºC) y con el MacConkey sorbita, y se realizan los cálculos correspondientes.
Del agar bilis- verde brillante salen a pesar 20 g para disolverlo en 0,5 litros de agua destilada:

Para el MacConkey salen a pesar 25,75 g en 0,5 litros de agua:

Para realizar la siembra:
Cuando ya están los agares gelificados (para la técnica de vaciado), vamos a proceder a la siembra de las muestras de yogur o huevo que se encuentran diluidas en los tubos de ensayo que hemos hecho anteriormente.
Se pueden realizar por dos métodos:
- Por inundación (o técnica de barri): consiste en coger 1 ml de la primera dilución del tubo de ensayo, con una pipeta automática, y ponerla en el centro de la placa petri que no tiene medio de cultivo y, a continuación, se vierte el tipo de agar que quieras, o bien el estándar (amarillo) o el MacConkey (rojo), o el bilis verde (verde). Se espera 10 minutos y se introduce en la estufa miucrobiológica para que proliferen y se reproduzcan los microorganismos.

                                                                                                             

                                                                                                              

- De vaciado: cuando ya está el agar gelificado coges con la pipeta automática una muestra de huevo o yogur y la viertes encima del medio de cultivo. Con una pipeta pasteur absorbes el sobrante y ya está lista la plata petri para introducirse en la estufa microbiológica.

 

Resultado:
Al día siguiente se ven los resultados de las siembras por las distintas técnicas:

- Por inundación, 1 ml de la muestra del yogur, los microorganismos han proliferado:

- Por la técnica de vaciado, 1 ml de la muestra de huevo, los microorganismos han proliferado: