Práctica 18: Tinción de Gram
MATERIAL:
- Papel de filtro.
- Portaobjetos.
- Paralelas.
- Cristalizador (fregadero).
- Asa de siembra.
- Pinzas de madera.
- Pipeta pasteur.
- Vidrio de reloj.
- Mechero de alcohol.
- Agua destilada.
- Microscopio óptico.
- Hisopos.
- Aceite de inmersión.
- Reactivos: violeta de genciana, alcohol 96o , fuchsina básica diluida, solución de lugol.
Segundo:
Tercero:
Cuarto:
TÉCNICA:
1. Una vez que ya está preparado todo el material, pasas un hisopo por la mucosa de la boca y lo extiendes por todo el porta, donde con una pipeta pasteur hemos vertido menos de una gota de agua.
2. Cuanto tenemos bien extendida la muestra, pasamos por el mechero de alcohol el porta sujetado por las pinzas de madera.
3. Nos dirigimos a las paralelas colocadas encima del fregadero para realizar las diferentes tinciones con los reactivos:
- el primer reactivo que vamos a utilizar es el violeta de genciana, el cual se va a dejar actuar durante 1 minuto.
- el segundo reactivo es el lugol, el cual va a actuar durante 1 minuto, de manera que se vierte con una pipeta pasteur sobre el violeta.
Pasado ese minuto lavamos la mezcla con agua destilada.
- a continuación, se vierte el alcohol de 96o y se deja durante 30 segundos.
- el último reactivo que se utiliza es la fuchsina básica diluida, y se deja actuar durante 3 minutos. 
4. Se lava la mezcla del porta con agua destilada de manera muy floja para no arrastrar todo el contenido adherido. Ahora se deja escurrir en el papel de filtro absorbente.
5. Por último, se pasa a observar al microscopio los microorganismos.
RESULTADO:
Al observar al microscopio podemos decir que se trata de un tinción Gram positiva, pues el color es azul-violeta, mientras que si fuera Gram negativa estaría de un color rosado.
Con el objetivo de 3,2 aumentos:
Con el objetivo de 10 aumentos:
Con el objetivo de 45 aumentos:
Con el objetivo de 100 aumentos + aceite de inmersión:
- Gram positiva:
- Gram negativa:
En el siguiente enlace aparece un vídeo de la universidad politécnica de Valencia en el cual se explica la tinción de gram paso a paso de manera muy sencilla para que se entienda fácilmente. Es decir, menciona el material necesario, cómo se llevaría a cabo la técnica y los diferentes resultados que se pueden obtener,
https://www.youtube.com/watch?v=oKXJa4_OAbQ
- Papel de filtro.
- Portaobjetos.
- Paralelas.
- Cristalizador (fregadero).
- Asa de siembra.
- Pinzas de madera.
- Pipeta pasteur.
- Vidrio de reloj.
- Mechero de alcohol.
- Agua destilada.
- Microscopio óptico.
- Hisopos.
- Aceite de inmersión.
- Reactivos: violeta de genciana, alcohol 96o , fuchsina básica diluida, solución de lugol.
Segundo:
Tercero:
Cuarto:
TÉCNICA:
1. Una vez que ya está preparado todo el material, pasas un hisopo por la mucosa de la boca y lo extiendes por todo el porta, donde con una pipeta pasteur hemos vertido menos de una gota de agua.
2. Cuanto tenemos bien extendida la muestra, pasamos por el mechero de alcohol el porta sujetado por las pinzas de madera.
3. Nos dirigimos a las paralelas colocadas encima del fregadero para realizar las diferentes tinciones con los reactivos:
- el primer reactivo que vamos a utilizar es el violeta de genciana, el cual se va a dejar actuar durante 1 minuto.
- el segundo reactivo es el lugol, el cual va a actuar durante 1 minuto, de manera que se vierte con una pipeta pasteur sobre el violeta.
Pasado ese minuto lavamos la mezcla con agua destilada.
- a continuación, se vierte el alcohol de 96o y se deja durante 30 segundos.
4. Se lava la mezcla del porta con agua destilada de manera muy floja para no arrastrar todo el contenido adherido. Ahora se deja escurrir en el papel de filtro absorbente.
5. Por último, se pasa a observar al microscopio los microorganismos.
RESULTADO:
Al observar al microscopio podemos decir que se trata de un tinción Gram positiva, pues el color es azul-violeta, mientras que si fuera Gram negativa estaría de un color rosado.
Con el objetivo de 3,2 aumentos:
Con el objetivo de 45 aumentos:
Con el objetivo de 100 aumentos + aceite de inmersión:
- Gram positiva:
- Gram negativa:
En el siguiente enlace aparece un vídeo de la universidad politécnica de Valencia en el cual se explica la tinción de gram paso a paso de manera muy sencilla para que se entienda fácilmente. Es decir, menciona el material necesario, cómo se llevaría a cabo la técnica y los diferentes resultados que se pueden obtener,
https://www.youtube.com/watch?v=oKXJa4_OAbQ
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