Práctica 19: Tinción de Gram.

MATERIAL:
- Papel de filtro.
- Portaobjetos.
- Paralelas.
- Cristalizador (fregadero).
- Asa de siembra.
- Pinzas de madera.
- Pipeta pasteur.
- Vidrio de reloj.
- Mechero de alcohol.
- Agua destilada.
- Microscopio óptico.
- Aceite de inmersión.
- Reactivos: violeta de genciana, alcohol 96o , fuchsina básica diluida, solución de lugol.


  Primero:                  



















     Segundo:


     Tercero:


     Cuarto:





TÉCNICA:
1. Una vez que ya está preparado todo el material, pasas un asa de siembra por los microorganismos del medio de cultivo y lo extiendes por todo el porta, donde con una pipeta pasteur hemos vertido menos de una gota de agua.

2. Cuanto tenemos bien extendida la muestra, pasamos por el mechero de alcohol el porta sujetado por las pinzas de madera. Se esteriliza el asa de siembra.




3. Nos dirigimos a las paralelas colocadas encima del fregadero para realizar las diferentes tinciones con los reactivos:
- el primer reactivo que vamos a utilizar es el violeta de genciana, el cual se va a dejar actuar durante 1 minuto y posteriormente se lava con agua destilada muy despacio. 
Se lava:


- el segundo reactivo es el lugol, el cual va a actuar durante 1 minuto, de manera que se vierte con una pipeta pasteur sobre el violeta.

Pasado ese minuto lavamos la mezcla con agua destilada.


- a continuación, se vierte el alcohol de 96o y se deja durante 30 segundos.

Posteriormente se lava: 

- el último reactivo que se utiliza es la fuchsina básica diluida, y se deja actuar durante 3 minutos.                                                          

4. Se lava la mezcla del porta con agua destilada de manera muy floja para no arrastrar todo el contenido adherido. Ahora se deja escurrir en el papel de filtro absorbente.




5. Por último, se pasa a observar al microscopio los microorganismos.

RESULTADO:
Al observar al microscopio lo que vemos es lo siguiente:
- con el objetivo de 10 aumentos:
 

- con el objetivo de 100 aumentos + aceite de inmersión:

 

Se puede ver en ambos aumentos que los microorganismos son gram positivos y negativos, porque presentan un color azul-violeta y rosaceo, respectivamente.


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