Práctica 16: Kligler + Siembra + Tinción.

noviembre 13, 2018

La siguiente práctica a comentar está relacionada con la anterior, es decir, con el medio de cultivo de agar estándar y su posterior siembra de microorganismos, tanto de boca como de las manos.
Va a constar de tres técnicas: Kligler, siembra en placa petri con medio de cultivo con agar estándar y tinción simple.

Siembra de la mucosa de la boca:

Siembra de las manos:

MATERIAL:
Es común a las tres técnicas:
- Kligler iron agar.
- Tubos de ensayo para kligler y sus tapones.
- Papel de filtro.
- Gradilla.
- Placa de petri con el medio de cultivo preparado (anterior práctica).
- Placa de petri con la siembra realizada y sus microorganismos.
- Hilo de platino para la siembra.
- Mechero de alcohol.
- Portaobjetos.
- Cubreobjetos.
- Agua destilada.
- Asa de siembra.
- Pinzas de madera.
- Pipeta pasteur.
- Paralelas.
- Azul de metileno.
- Aceite de inmersión.
- Microscopio óptico.

TÉCNICA:

A. Kligler:

1. Se enciende el mechero de alcohol para mantener la asepsia y además esterilizar el material a utilizar. Por ello, se esteriliza el hilo de platino.

2. Se toma una muestra de la siembra realizada con el hilo, ya sea de microorganismos de la boca o manos.

3. Ahora, abrimos el tubo de Kligler con el dedo meñique de la mano derecha, pasamos el tubo por el mechero, se introduce el hilo de platino en su interior hasta casi el fondo, pero sin tocarlo, y al sacarlo lo arrastramos por la pared del tubo por la zona en la que encontramos una forma de pico de flauta haciendo zigzag.

4. Tapas el tubo con el tapón que sigues teniendo en tu dedo meñique y esterilizas el hilo de platino.

5. Se etiqueta el tubo y se introduce en la estufa microbiológica en una gradilla.

B. Siembra en placa de petri con medio de cultivo con agar estándar:

1. Tomas una muestra de la placa petri con la previa siembra (mano o boca) con el asa de siembra que, anteriormente, has esterilizado.

2. Realizas una nueva siembra en una placa de petri con agar estándar gelificado sin manipular y lo haces en forma de zigzag por agotamiento, entre otras muchas técnicas que hay, como por ejemplo la de los cuatro cuadrantes. Esterilizas el asa de siembra.

3. Por último, tapas la nueva siembra, le das la vuelta a la placa, la etiquetas, y la introduces en la estufa microbiológica.

C. Tinción simple:

1. Echamos una gota de agua destilada con la pipeta en el portaobjetos y, con el asa de siembra ya esterilizada, se toma una muestra de la placa petri con la siembra anteriormente realizada, en nuestro caso de la mucosa de la boca, y frotas extendiéndola por el porta junto con el agua. Vuelves a pasar el asa de siembra por el mechero.

2. Ahora, pasamos la mezcla del porta sujeto con las pinzas de madera por el mechero de alcohol para que se adhiera.

3. Cuando estamos en la paralelas, echamos unas gotas de azul de metileno para teñirlo y esperamos 5 minutos.

4. Una vez transcurrido este tiempo, echas agua destilada cuidadosamente por encima y se deja escurriendo en el papel de filtro.

5. Ahora ya tenemos la preparación lista para observar al microscopio.

RESULTADO:

A. Kligler:

Un día después, lo sacamos de la estufa y se puede observar cómo se han reproducido los microorganismos en la pared del tubo por donde hicimos el zigzag. El color del kligler no ha cambiado notoriamente, simplemente la forma en pico de flauta antes era más roja y ahora tira más hacia naranja.