Práctica 15: Medio de cultivo y siembra.

En la siguiente práctica se va a realizar un medio de cultivo con agar estándar en un matraz erlenmeyer para, posteriormente, realizar una siembra.

MATERIAL:
- Papel de filtro.
- Agua destilada.
- Matraz erlenmeyer.
- Cucharilla de metal.
- Probeta.
- Mechero de alcohol.
- Mechero normal.
- Termómetro.
- Asa de siembra.
- Placas de petri (15 ml cada una aproximadamente).
- Placa calefactora.
- Balanza.
- Cazo.
- Papel de aluminio.
- Agar estándar.
- Barilla agitadora.
- Guantes térmicos.
- Algodón hidrófilo.
- Hisopo.
- Estufa microbiológica.
- Embudo.

              


TÉCNICA:
Antes de proceder a la pesada del agar hay que realizar el cálculo para saber la cantidad que hay que pesar. Para saberlo hay que tener en cuenta lo que pone en el bote, en este caso dice que en 1 litro de agua se diluyen 23,5 g de agar, por lo que si se quieren emplear 0,5 litros de agua, hacemos los cálculos y obtenemos 11,75 g a pesar.
Para hacer que la mezcla de agar y agua alcance los 100ºC hay dos opciones:
a. Agitar la mezcla del agar con el agua en el agitador magnético, el cual contiene un imán y mide la temperatura.
b. Se pone la mezcla en un cazo y se calienta en la placa calefactora agitándolo con una varilla. La temperatura se mide con un termómetro.
En nuestro caso hemos optado por la opción de calentar la mezcla en el cazo.

1. Se pesan 11,75 g de agar en la balanza, encima de una papel de aluminio, y se vierte al cazo que está encima de la placa calefactora para a continuación añadirle el agua (488 ml previamente introducidos en la probeta).

                                                     


                                                     


2. Con la barilla agitadora se diluye poco a poco hasta que la mezcla sea homogénea. Se pretende que el compuesto alcance los 100ºC llevándolo a ebullición.

                   

3. Una vez alcanzada dicha temperatura se deja 1 minuto a mínima potencia de calor y se vierte en el matraz erlenmeyer por medio de un embudo y usando los guantes térmicos.

4. Se tapa con un algodón hidrófilo y esperamos a que baje a 50ºC.

Para ayudar a que baje la temperatura podemos introducir el matraz ya preparado con el compuesto en un recipiente con agua fría y, una vez que se encuentra a 50ºC se puede introducir en un recipiente al baño maría.
Otra idea para que baje la temperatura es repartir el compuesto en dos matraces.
5. Como he comentado antes, se reparte el contenido en dos matraces.

6. Ahora vamos preparando las placas de petri dejándolas medio abiertas para echar el agar y encendemos el mechero de alcohol para, mientras se realiza el vertido, mantener la asepsia y evitar cualquier infección.

7. Una vez vertido todo el contenido en las placas, esperamos a que gelifique, se tapa la placa y se da la vuelta.

                                                             

8. A continuación, se da la vuelta a las placas para almacenarlas en el frigorífico. Para sujetarlas, podemos poner celo a su alrededor.

                                     

Para hacer la siembra:
1. Con un hisopo se cogen muestras de la boca o de las manos y se pasa por el medio de cultivo ya gelificado en forma estriado, se tapa la placa petri y se introduce en la estufa microbiológica.

                                                        

                                                                     

RESULTADO:
Como finalización del proceso se obtienen las placas de petri con el agar estandar ya preparado en estado solificado (gelificado), como se muestran en las imágenes anteriores.
Se almacenan en el frigorífico las que no se usen para hacer la siembra. En cambio, las que se han empleado para realizar la siembra se depositan en la estufa microbiológica.
Unos días más tarde, los microorganismos se han reproducido y lo que se ve es lo siguiente: